Obniżona aktywność urokinaza oskrzelowo-pęcherzykowego u pacjentów z zespołem zaburzeń oddechowych dorosłych ad 8

Płyn po płukaniu od pacjentów z ARDS, który zawierał od 0 do 0,008 IU urokinazowej aktywności na mililitr płynu, konsekwentnie wytwarzał pasma lizujące w podkładzie przy 55 kd (ścieżki 2 do 4). Ta mobilność odpowiadała ruchowi oczyszczonej urokinazy (ścieżka 6) i była jedyną formą aktywności urokinazy (ścieżki i 5) znajdującą się w płynie po płukaniu od osób zdrowych. Strefy lizy w płynie po płukaniu od pacjentów z ARDS pojawiały się na ogół w tym samym czasie lub wcześniej niż te w płynie do płukania od zdrowych osobników, zawierających od 0,10 do 0,15 IU urokinazy na mililitr. Ponadto, dodatkowa strefa lizy występowała konsekwentnie w ilości około 83 kD w płynie po płukaniu od wszystkich poza jednym pacjentem z ARDS. Wygląd tego prążka zależał od dodatku plazminogenu do żeli agarozowych. W kilku przypadkach widoczna była także słaba strefa lizy przy 100 kD. Strefy te były zgodne z obecnością kompleksów urokinazy z PAI-1 lub PAI-2.10, 25. Nie stwierdzono ani prążków 83-kd, ani 100-kd po elektroforezie płynu z płukania normalnych pacjentów, co sugeruje znacznie mniej tworzenie w tych próbkach kompleksów inhibitorów urokinazy-urokinazy. W dodatkowych badaniach kontrolnych, oczyszczony tkankowy aktywator plazminogenu wytwarzał strefę lizy między 55 kd a 83 kd, zgodną z jej masą cząsteczkową wynoszącą 66. Lysis kompatybilna z obecnością tkankowego aktywatora plazminogenu nie została znaleziona w badaniach płynu płuczącego z albo pacjenci z ARDS lub normalnymi podmiotami. W celu dalszego zbadania kompleksów urokinazy, płyn płuczący od każdego z pięciu pacjentów z ARDS został zaadsorbowany przeciwciałami (IgG) na PAI-1, PAI-2 lub fibronektynę, a przeciwciała zaadsorbowane na kulkach z białkiem A Sepharose. Zaadsorbowany materiał wymywano następnie z kulek i badano pod kątem obecności urokinazy w teście z podłożem z użyciem fibryny. Wyniki trzech takich eksperymentów przedstawiono w Tablicy B na Fig. 5. Eluaty do immunoadsorpcji zawierały prążki w regionach 55 kd i 83 kD, co wskazuje, że przeciwciała przeciwko PAI-1 usunęły kompleksy urokinazy z inhibitora z pierwotnej reakcji. mieszaniny. Wzory aktywności w tych eluatach były podobne do tych, które znaleziono w bezpośrednich testach płynu do płukania od pacjentów z ARDS (panel A). Niewielką lub żadną aktywność urokinaz uzyskano stosując przeciwciała przeciwko PAI-2 lub fibronektynie (Panel B). Ponadto, żadna aktywność urokinaz nie została odzyskana z płynu z płukania od zdrowych osobników, gdy przeszła tę samą procedurę immunoadsorpcji, co wskazuje, że te trzy przeciwciała nie wiążą się za darmo urokinazy (dane nie przedstawione). Ponieważ przeciwciała PAI-1 usuwały urokinazę z płynu z płukania od pacjentów z ARDS, urokinaza prawdopodobnie tworzy kompleksy z PAI-1 (zarówno odwracalnie, jak i nieodwracalnie) w płynie do płukania u takich pacjentów.
Dyskusja
Wyniki te dają nowy wgląd w katabolizm wysięku fibrynowego, który rozwija się u pacjentów z ARDS. Stwierdziliśmy, że normalna droga fibrynolizy oskrzelowo-pęcherzykowej jest znacząco obniżona u takich pacjentów podczas wczesnej fazy wysiękowego ich choroby
[patrz też: izba aptekarska koszalin, dpj jakubowski, orto medica kalisz ]